atp熒光檢測儀快速檢測活菌數(shù)的方法研究及應(yīng)用，細(xì)菌總數(shù)是國內(nèi)外公認(rèn)的飲用水、食品、醫(yī)院及其科學(xué)研究過程中所涉及樣品的衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)指標(biāo)，其測定技術(shù)在食品衛(wèi)生安全及疾病防治、環(huán)境監(jiān)測中廣泛應(yīng)用。隨著微生物資源開發(fā)與利用，所需檢測微生物指標(biāo)的樣品范圍和數(shù)量不斷擴(kuò)大。目前細(xì)菌總數(shù)檢測方法主要有傳統(tǒng)的平板菌落計數(shù)法[1]和比濁法，其操作步驟復(fù)雜，而且需培養(yǎng)24?48 h方能出結(jié)果，且因培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)有限和好氧培養(yǎng)條件的特點(diǎn)，僅有一些細(xì)菌能生長而被檢測到，其結(jié)果不能代表真正的細(xì)菌總數(shù)。近年來開發(fā)的新型檢測技術(shù)以縮短檢測時間、簡化操作、降低檢測成本、提高檢測效率等優(yōu)勢而被廣泛關(guān)注[2]，如高光譜技術(shù)[3-5]、熒光定量PCR技術(shù)[6-7]、ATP生物發(fā)光技術(shù)[8-10]、流式細(xì)胞計數(shù)法[11-12]、3M測試片快速分析技術(shù)[13]、MTT法快速檢測技術(shù)[14-15]、TTC顯色法[16]、集合酶聯(lián)反應(yīng)技術(shù)[17-18]、介電譜技術(shù)[19-20]等。然而這些新型方法大多是通過實(shí)驗(yàn)室大型設(shè)備實(shí)現(xiàn)的，設(shè)備價格高，檢測條件嚴(yán)格，不易實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測。開發(fā)快速、便捷、靈敏的細(xì)菌總數(shù)檢測方法具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。

        Calcein UltraGreen? AM是一種疏水性化合物，可輕松通過活細(xì)胞膜，熒光染料的AM基團(tuán)被活細(xì)胞中存在的細(xì)胞酯酶水解切斷，在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生強(qiáng)熒光特性，該反應(yīng)為不可逆反應(yīng)，結(jié)合成功后，即使細(xì)胞死亡該熒光特性也會一直存在。然而酯酶活性與活細(xì)胞數(shù)成正比，因此，活細(xì)胞與由Calcein UltraGreen? AM催化酯酶水解產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度直接相關(guān)。該熒光染料的光譜特性為激發(fā)波長496 nm、發(fā)射波長524 nm，染色活動物細(xì)胞的條件為染料濃度在1?10 μmol/L、37 ℃下反應(yīng)5?10 min，可以將濃度為106?108 cells/mL的活動物細(xì)胞準(zhǔn)確染色。由于該染色條件是用于染色動物細(xì)胞，目前尚未有文獻(xiàn)報道過應(yīng)用該染料檢測活菌數(shù)，因此需要建立其針對微生物細(xì)胞的探針檢測條件。

        本研究基于新型熒光染料Calcein UltraGreen? AM的熒光特性及其在活細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定的反應(yīng)特性，并結(jié)合小型便捷式熒光儀，以開發(fā)兼有現(xiàn)場快速、便捷、靈敏的細(xì)菌總數(shù)檢測方法為目的，研究并建立一種活細(xì)菌總數(shù)快速熒光檢測法，且將方法應(yīng)用于實(shí)際樣品細(xì)菌總數(shù)的測定。atp熒光檢測儀有效的檢測食品中的微生物污染狀況，降低了食品安全事故的發(fā)生，儀器能夠在市場、家庭、食堂餐廳等范疇普遍應(yīng)用，儀器體積小，反響靈活度高，是食品安全檢測的便利儀器。